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번호 검색 :0 저자 :사이트 편집기 게시: 2022-07-09 원산지 :강화 된
포도 씨앗 추출물포도 씨앗에서 추출한 일종의 폴리 페놀은 주로 프로시 아니 딘, 카테킨, 에피 카테킨, 갈산, 에픽 카테킨 갈 레이트 및 기타 폴리 페놀로 구성된 일종의 폴리 페놀입니다.
베이트 스미스 방법
이 방법은 포도 종자 추출물에서 프로 안토시 아니 딘을 결정하고, 그 함량은 프로 안토시 아니 딘 지수에 의해 표현된다. Proanthocyanidins의 표준이 없기 때문에,이 방법은 포도 종자 추출물에서 Proanthocyanidins의 상대적 가치 만 결정합니다.
원칙
프로시아니딘은 산성 조건 하에서 가열함으로써 적색 안토시아닌으로 전환된다.
운영 절차
적절한 양의 포도 종자 추출물 (약 15 ~ 40mg)의 무게를 측정하고 메탄올에 용해시키고 마지막으로 100ml에 용해시킵니다. 1ml의 샘플 용액을 가져 와서 10ml 비색 튜브에 첨가 한 다음 6ml의 염산 N- 부탄올 용액 (5/95, v/v)을 첨가하고 97 ℃에서 40 분 동안 반응하고 꺼내고 빠르게 식히십시오. 550nm에서 흡광도를 측정하고 추출 용액 대신 빈으로 메탄올을 사용하십시오.
Proanthocyanidin index = a × 7.0/w。 a : 흡광도; W : 샘플 질량 (g).
Bate Smith 방법에 의해 측정 된 포도 종자 추출물의 Proanthocyanidin 지수는 일반적으로 80 내지 100이며 때로는 100보다 클 수 있습니다.
포터 방법
베이트 스미스 방법의 재현성은 매우 열악 하고이 조건 하에서 프로시아니딘의 반응은 그리 철저하지 않기 때문이다. 따라서 Porter et al. 베이트 스미스 방법을 개선했습니다. 포터 방법의 개선은 주로 반응 정도와 색의 안정성을 향상시키기 위해 시약에 Fe3+를 추가하는 것입니다. 이 방법은 또한 프로시 아니 딘의 상대적인 함량을 결정하며 결과는 PVU (포털 값 단위)로 표현됩니다. 포터 방법의 원리는 베이트 스미스 방법의 원리와 동일합니다.
운영 절차
적절한 양의 포도 종자 추출물 (약 10 ~ 30mg)의 무게를 측정하고 메탄올에 용해시키고 마지막으로 100ml에 용해시킵니다. 1ml의 샘플 용액을 가져 와서 10ml 비색 튜브에 첨가 한 다음 6ml의 염산 -N- 부탄올 (5/95, V/V), 0.2ml의 2.0% 암모늄 제 2 철 설페이트 용액 (2mol.l로 용해 된 2.2ml. -1 염산), 40 분 동안 97 ℃에서 반응하고, 그것을 꺼내서 빨리 식히고, 550nm에서 흡광도를 측정 한 다음, 추출물 용액을 메틸 알코올로 교체합니다.
PVU = A × 7.2/W。 A : 흡광도; W : 샘플 질량 (g).
미국 포도 종자 방법 평가위원회는 포도 종자 추출물의 PVU가 250 세에서
350. PVU는 너무 낮아서이 생성물에서 프로 안토시 아니 딘의 함량이 낮다는 것을 나타낼 수있다. PVU가 너무 높아서, 생성물에서 고분자 프로시 아니 딘의 함량이 높다는 것을 나타냅니다. 그러나, 포터 방법은 어떤 프로 안토시 아니 딘이 검출되는지를 구별 할 수 없으므로, 포도 종자 추출물의 PVU가 300 인 경우, 생성물은 더 많은 올리고머 프로 아산토시 아니 딘 또는 더 많은 단량체 및 고분해성 프로 안토시 아니 딘을 가질 수있다.
American Grape Seed Method Evaluation Committee는 포도 종자 추출물에서 총 폴리 페놀 또는 프로 안토시 아니 딘의 정량적 분석에 상기 두 가지 방법이 사용될 수 없다고 생각합니다.
Folin Ciocalteau 방법
포도 종자 추출물에서 총 폴리 페놀의 함량은이 방법에 의해 결정되며, 갈산은 일반적으로 기준 물질로 사용된다. 이 방법의 장점은 추출물에서 총 폴리 페놀의 함량을 정량적으로 분석 할 수 있다는 것입니다. 단점은 폴리 페놀의 유형을 구별 할 수 없다는 것입니다 (예 : 결정이 단량체인지 중합체인지); 또한, 단백질, 핵산, 아스코르브 산 및 기타 쉽게 산화 된 물질 도이 반응에 참여하며 포도 종자 추출물이 간음되는지 여부를 구별하는 것은 불가능합니다. 단량체 및 프로 안토시 아니 딘 반응의 요인은 다르기 때문에, 측정 된 함량과 포도 종자 추출물의 실제 함량 사이에 특정 편차가 있습니다.
원칙
알칼리성 용액에서, 페놀 화합물은 wolfram molybdic acid (W6+)를 W5+로 감소시켜 청색 화합물을 생성 할 수있다. 색의 깊이는 폴리 페놀의 함량과 양의 상관 관계가 있습니다. 청색 화합물은 760nm에서 최대 흡수 피크를 갖는다.
운영 절차
적절한 양의 포도 종자 추출물의 무게를 측정하고 물로 녹이면 농도는 약 0.1mg/ml입니다. 1ml의 샘플 용액을 가져다가 10ml 비색 튜브에 첨가 한 다음 1ml의 탈 이온수, 0.5ml의 Folin Ciocalteau 시약 및 1.5ml의 26.7% NA2CO3 용액을 순서대로 첨가하고, 물로 부피를 10ml로 고정하고, 실내에서 반응합니다. 2 시간 동안 온도를 내고 760nm에서 흡광도를 측정하십시오.
갈산을 기준 물질로 취하고, 다른 농도의 용액을 준비하고, 상기 방법에 따라 반응하고, 흡광도를 측정하십시오. 흡광도 대 농도로 표준 곡선을 그립니다. 추출물에서 총 폴리 페놀의 함량은 표준 곡선으로부터 얻을 수있다 (갈산과 동등한 함량으로 표현 됨). 미국 포도 종자 방법 평가위원회는 포도 종자 추출물에서 총 폴리 페놀을 결정하기 위해이 방법을 사용하기로 동의했지만,이 방법은 단량체와 프로 안토시 아니 딘의 Folin Ciocalteau 시약과의 반응 사이의 차이를 확인하기 위해 더욱 개선되어야한다고 제안했다.
바닐린 탐지 방법
이 방법은 포도 종자 추출물에서 플라본 -3-ol의 함량을 결정하는 데 사용되지만 단량체와 폴리머를 구별 할 수는 없습니다. 카테킨은 일반적으로 정량적 결정을위한 표준으로 사용됩니다.
원칙
산성 조건 하에서, 플로로 글루 시놀, 리소 시놀, 고리의 플라 바놀 및 폴리 (프로시아니딘 A 고리)는 높은 화학 활성을 갖는다. Phloroglucinol 또는 Ressorcinol은 바닐린과 응축 될 수 있으며, 생성물은 산의 작용하에 착색 된 양성 탄소 이온을 형성합니다. 샘플의 농도는 생성 된 색과 양의 상관 관계가 있습니다.
운영 절차
적절한 양의 포도 종자 추출물을 측정하고 특정 부피의 메탄올로 녹인다. 마지막으로, 포도 종자 추출액 용액의 농도는 약 0.1mg/ml이다. 10ml 비색 튜브에 1ml의 샘플 용액을 첨가 한 다음 2.5ml의 바닐린 메탄올 용액 (1.0% w/v) 및 25% 25% 황산 메탄올 용액을 연속적으로 첨가합니다. 실온에서 15 분 동안 반응하고 510nm에서 흡광도를 측정합니다.
카테 킨을 기준 물질로 취하고, 다른 농도의 용액을 준비하고, 상기 방법에 따라 반응하고, 흡광도를 측정하고, 농도에 대한 흡광도로 표준 곡선을 그립니다. 추출물에서 Flavane-3- 알코올의 함량은 표준 곡선으로부터 얻을 수있다.
포도 종자 추출물에서 플라본 -3-ol을 측정하기위한 바닐린 검출 방법은 일반적으로 추출물을 메탄올로 용해시키고 시약을 준비하는 것입니다. 또한 빙하 아세트산은 추출물을 용해시키고 시약을 준비하는 데 사용될 수 있지만,이 둘의 측정 된 데이터는 매우 다릅니다. 메탄올이 용매로 사용될 때, 바닐린 방법은 총 플라본 -3- 알코올의 양을 측정하며, 이는 중합 된 프로 시니 딘에서 모든 플라본 -3- 알코올의 양에 대해 발생할 수있다. 빙하 아세트산이 용매로 사용될 때, 바닐린 방법은 단량체 플라본 -3- 알코올의 양을 측정하고 중합 된 프로 안토시 아니 딘 말단 플라본 -3- 알코올의 양을 측정하는 반면, 중합 된 프로 안토시 아니 딘의 중간에서 플라본 -3- 알코올은 측정 할 수 없다. 메탄올은 포도 종자 추출물에서 플라본 -3-ol의 양을 결정하기 위해 주로 용매로 사용됩니다. 추출물에서 프로 안토시 아니 딘의 평균 중합 정도는 동시에 2 개의 용매를 사용하여 대략 측정 할 수있다.
미국 포도 종자 방법 평가위원회는 포도 종자 추출물의 활성 성분을 감지하기 위해이 방법을 사용하지 않기로 동의했습니다.
HPLC 방법
이 방법은 추출물에서 각 단량체, 올리고머 및 동종일의 함량을 결정합니다. 그러나, 기준 물질 및 분석 방법의 한계로 인해 포도 종자 추출물에서 단량체 및 일부 올리고머의 함량만이 결정될 수있다. 실제 적용에서는 단량체 함량을 결정해야합니다. 포도 종자 추출물의 주요 단량체는 카테킨, 에피 카테킨, 갈산, 에피 카테킨 갈 레이트입니다.
포도 종자 추출물에서 단량체의 함량은 일반적으로 약 10.0%, 최대 30.0%입니다. 포도 종자 추출물의 성분의 복잡성으로 인해 샘플이 전처리되지 않으면 HPLC에 의해 다양한 단량체를 완전히 분리하는 것은 일반적으로 어렵다. 따라서, 주사 전, 높은 중합체를 제거하고 단량체의 함량을 개선하기 위해 추출물을 전처리해야한다. 일반적인 전처리 방법에는 실리카 겔 컬럼 크로마토 그래피, Sephadexlh-20, Sephadex G25, Toyopeah TSK HW40 및 기타 컬럼 크로마토 그래피 방법이 포함됩니다. 샘플은 또한 얇은 층 크로마토 그래피에 의해 전처리 될 수 있으며, 일반적으로 톨루엔 : 아세톤 : 아세트톤 : 아세트산 = 3 : 3 : 1 (v/v/v)를 개발 제로 사용한다.
